Etapy diagnostyki laboratoryjnej chorób wirusowych. Urządzenie laboratorium wirusologicznego.

1) Wskazanie (wykrycie) wirusa w materiale patologicznym:

Metody ekspresowe:

a) Wykrywanie wirionów:

(1) Mikroskopia elektronowa;

(2) mikroskopia świetlna (ospa);

b) Wykrywanie wirusowego AG w reakcjach serologicznych (RIF, ELISA, RSK, RDP, RNGA);

c) Wykrywanie ciałek inkluzyjnych za pomocą mikroskopii świetlnej i fluorescencyjnej;

d) Wykrywanie wirusowych kwasów nukleinowych metodą PCR, sondy DNA;

e) Wykrywanie hemaglutyniny w RHA;

f) Wykrywanie aktywności zakaźnej wirusa w teście biologicznym.

2) Izolacja (izolacja) wirusa z materiału patologicznego. Izolację przeprowadza się niezależnie od wyników pierwszego etapu metodą biologiczną w trzech „ślepych” pasażach. Przejście to infekcja żywego systemu w celu uzyskania nowej populacji wirusa. „Ślepy” fragment- infekcja bez widocznych oznak reprodukcji wirusa. Po trzech pasażach w komórkach układu żywego wirus kumuluje się, czemu towarzyszy pojawienie się oznak rozmnażania, widocznych na poziomie makroorganizmu. Na przykład, kiedy test biologiczny na zwierzętach: objawy kliniczne, śmierć, zmiany patologiczne; na zarodki kurze- śmierć, zmiany patologiczne, hemaglutynacja; na Hodowlę komórkową– CPE, hemadsorpcja, blaszki, RIF itp. Takie zakażone żywe systemy określa się jako pozytywny wynik biologiczny. Jednak nie jest jeszcze możliwe dokładne określenie rodzaju czynnika zakaźnego. Dlatego materiał patologiczny pobierany jest z pozytywnego testu biologicznego, który jest warunkowo uważany za wtórny, tj. wybrany z żywego systemu z oznakami pozytywnego testu biologicznego. Przygotowuje się z niego zawiesinę zawierającą wirus lub odciski wacików (izolowany wirus).

3) Identyfikacja (oznaczenie gatunku) wyizolowanego wirusa w reakcjach serologicznych lub przez analizę PCR. W rzadkich przypadkach możliwa jest identyfikacja za pomocą innych znaków, na przykład przez inkluzje wewnątrzkomórkowe (ciała Babes-Negri dla wścieklizny).

4) W razie potrzeby dowód etiologicznej roli wyizolowanego wirusa. W tym celu stosuje się reakcje serologiczne, w których jako antygen stosuje się wyizolowany wirus, a jako przeciwciała stosuje się sparowane próbki surowicy krwi w dwukrotnych seryjnych rozcieńczeniach. Wynik dodatni, świadczący o etiologicznej roli wyizolowanego wirusa, to czterokrotny lub więcej krotny wzrost miana przeciwciał w drugiej próbce surowicy krwi w porównaniu z pierwszą.

5) Diagnoza retrospektywna. W tym celu stosuje się sparowane surowice krwi pobrane na etapie wyzdrowienia, które są badane w reakcjach serologicznych ze standardowym specyficznym antygenem zgodnie ze wstępną diagnozą choroby wirusowej. Wzrost miana przeciwciał 4 lub więcej razy w drugiej próbce w porównaniu z pierwszą świadczy o aktywnym procesie zakaźnym zachodzącym w organizmie zwierzęcia w okresie pobierania z niego krwi. W tym przypadku choroba jest wywoływana przez wirusa, dla którego stwierdzono wzrost miana przeciwciał w sparowanych surowicach.

Urządzenie laboratorium wirusologicznego.

Do zorganizowania laboratorium diagnostycznego wykorzystuje się wydzielony przedział, składający się z co najmniej 5-6 pokoi.

Pod laboratorium przydziel jasny pokój. Pomieszczenia do pracy z materiałem wirusowym powinny być dobrze oświetlone i składać się z przedpokoju oraz skrzynki oddzielonej szklaną przegrodą z drzwiami. W pudłach umieszczane są wyłącznie stoły, krzesła i akcesoria do pracy. Powierzchnia stołów pokryta jest stalą nierdzewną, plastikiem lub szkłem, a nad blatem zainstalowane są lampy bakteriobójcze. Przy wejściu do puszki umieszczona jest gumowa gąbczasta mata dezynfekcyjna nasączona środkiem dezynfekującym. W pre-boxie znajduje się sterylna odzież i wyposażenie odpowiadające przeznaczeniu pudełka. Laboratorium wyposażone jest w zimną i ciepłą wodę oraz wentylację z doprowadzeniem sterylnego powietrza.

Do rejestracji napływającego materiału patologicznego jest przeznaczona Przyjęcie, na którym znajduje się kilka stołów tapicerowanych blachą ocynkowaną oraz pojemniki ze środkami dezynfekującymi (3% chloramina, wodorotlenek sodu lub 5% fenol).

W pomieszczeniu obróbki wstępnej materiałów ( otwarcie) otwierają zwłoki i wybierają materiał do dalszych badań.

Boxy pokojowe wyposażane są w zależności od przeznaczenia.

Naczynia, pożywki, sprzęt, pożywki są sterylizowane w autoklawie, a materiał zakaźny jest neutralizowany. Konieczne jest posiadanie dwóch autoklawów: do czystych materiałów i do zakażonych.

Mycie przeznaczone jest do mycia naczyń, sprzętu i urządzeń.

Wiwarium musi posiadać oddział kwarantanny, pomieszczenia dla zwierząt zdrowych i doświadczalnych oraz pomieszczenia gospodarcze.

W laboratorium wirusologicznym dowolnego typu obowiązkową częścią laboratorium jest skrzynka nablatowa, a najlepiej skrzynka z laminarnym doprowadzeniem powietrza.

Laboratorium wirusologiczne pracuje nad izolacją szczepów wirusów, ich identyfikacją i hodowlą oraz prowadzone są różne badania naukowe. Podczas pracy z wirusami musisz przede wszystkim:

1. Unikaj zanieczyszczenia szczepów wirusa obcą mikroflorą;

2. Zapewnij bezpieczeństwo personelu roboczego przed możliwym zakażeniem wirusami;

3. Zapewnienie bezpieczeństwa otaczającej populacji przed zarażeniem infekcjami wirusowymi poprzez ścieki, zwłoki zwierząt doświadczalnych itp.

W badaniu materiałów uzyskanych od pacjentów z infekcjami wirusowymi, w celu diagnostyki laboratoryjnej tych chorób, różne metody:

· Metody mikroskopii elektronicznej iw mniejszym stopniu mikroskopii świetlnej;

· Metody izolacji i hodowli wirusów w hodowlach komórkowych;

· Metody izolacji i hodowli wirusów w rozwijających się zarodkach kurzych oraz u wrażliwych zwierząt doświadczalnych;

Wykrywanie wirusów na podstawie ich zdolności hemaglutynacji;

· Różne serologiczne metody badawcze: metody tradycyjne i ekspresowe;

· Metody badań genetyki molekularnej – hybrydyzacja molekularna i reakcja łańcuchowa polimerazy.

1.1.2. Materiały testowane pod kątem infekcji wirusowych

Podczas pobierania materiału zakaźnego od ludzi i zwierząt należy wziąć pod uwagę tropizm wirusów do niektórych tkanek i narządów, sposoby izolacji wirusa podczas otoczenie zewnętrzne i cechy patogenezy określonej infekcji wirusowej.

Istnieją wirusy pneumotropowe, enterotropowe, hepatotropowe, limfotropowe, neurotropowe i dermotropowe. W zależności od tropizmu badanie podlega: różne materiały. Na przykład badają śluz z gardła, plwociny itp., jeśli wirus jest pneumotropowy; ruchy jelit - z wirusami enterotropowymi; płyn z pęcherzyków lub krost, strupów - jeśli wirus ma dermotropizm itp.

1.1.3. Postępowanie z materiałem zawierającym wirusy

Materiały zakaźne, z uwzględnieniem tropizmu wirusów i aseptyki, są umieszczane w sterylnym pojemniku, starannie zamykane i wysyłane do laboratorium, umieszczane w termosie z lodem.

Zaleca się jak najszybsze zbadanie materiału, ponieważ wirusy są szybko dezaktywowane. Zachowanie wirusa ułatwia umieszczenie badanego materiału (w 50% roztworze glicerolu) w lodówce w temperaturze nieprzekraczającej 5°C. niezawodny sposób- jest to przechowywanie w stanie zamrożonym w temperaturze -45 ° C i niższej; w takich warunkach wirus może pozostać żywotny przez długi czas.

Przetwarzanie gęstego materiału zawierającego wirusy rozpoczyna się od zmielenia go w moździerzu lub zmielenia w specjalnych urządzeniach - homogenizatorach. Następnie przygotowuje się 10% zawiesinę w roztworze soli, którą odwirowuje się przy 2000-3000 obr./min przez 15-30 minut w celu wytrącenia dużych cząstek. Wirusy pozostają w supernatancie, który jest poddawany dalszym badaniom.

Ciekły materiał zawierający wirus jest bezpośrednio odwirowywany i otrzymuje się również supernatant.

W przypadku wątpliwości co do bakteriologicznej sterylności badanego supernatantu zawierającego wirus dodaje się do niego antybiotyki w celu zniszczenia obcych mikroorganizmów. Antybiotyki nie wpływają na wirusy i pozostają żywotne.

1.1.4 Metody badań mikroskopowych w wirusologii

- Mikroskopia elektronowa

Preparaty elektronowe są przygotowywane z oczyszczonych i stężonych zawiesin zawierających wirusy lub ultracienkich skrawków tkanek zakażonych wirusami. Obiekty wirusowe są nakładane na specjalne podłoża foliowe umieszczone na kratkach nośnych. Warstwy podłoża muszą być bardzo cienkie (nie więcej niż 30 nm grubości), przezroczyste i wystarczająco mocne, np. węgiel koloidalny. Folie są stosowane do podtrzymywania siatek wykonanych z miedzi (średnica 2-3 mm) z licznymi otworami. Ponadto preparaty są przetwarzane na różne sposoby.

Metody natryskiwania metali używany do otrzymywania środków kontrastowych. Opary metali ciężkich (złoto, platyna, uran itp.) powstają w specjalnym urządzeniu pod próżnią i wysoka temperatura, skierowany pod ostrym kątem do preparatu zawierającego wirusa. Wirusy pokryte są cienką warstwą metalu.

Metoda ujemnego kontrastu opiera się na fakcie, że gdy lek zostanie potraktowany niektórymi solami metali ciężkich, na przykład 1-2% roztworem kwasu fosfowolframowego, powstaje gęstsza warstwa, która nie przepuszcza elektronów i w której jest bardziej przezroczysta dla elektronów badane obiekty są wyraźnie widoczne.

Technika ultracienkich przekrojów połączona z ujemnym wzmocnieniem kontrastu jest najlepszy do badania drobnej struktury wirionów i badania etapów interakcji wirusów z komórką, ale jednocześnie jest najtrudniejszy. Badane fragmenty zainfekowanej tkanki lub innego materiału zawierającego wirusy są utrwalane w specjalnym utrwalaczu (np. osm). Odwodniony przez kolejne umieszczanie w alkoholach o rosnącej mocy. Próbki wypełnione są specjalnym tworzywem sztucznym, z którego po polimeryzacji powstają stałe przezroczyste bloki. Z bloczków na specjalnym mikrotomie przygotowywane są ultracienkie skrawki o grubości 10-20 nm, a powstałe skrawki kontrastuje się umieszczając je w roztworze kwasu fosfowolframowego.

Przygotowane wyżej opisanymi metodami preparaty bada się w transmisyjnym mikroskopie elektronowym, którego rozdzielczość sięga 0,2-0,3 nm. Obraz leku obserwuje się na ekranie fluorescencyjnym mikroskopu elektronowego oraz fotografuje się specjalne klisze fotograficzne, z których uzyskuje się odbitki. Otrzymane powiększenia: ×100000-×400000.

Skaningowa mikroskopia elektronowa Odbywa się to za pomocą skaningowego mikroskopu elektronowego, w którym cienka wiązka elektronów szybko przemieszcza się nad badanym obiektem, czyli skanuje jego powierzchnię. W efekcie dochodzi do promieniowania elektronów wtórnych, które przechodząc przez lampę katodową zamieniane są na trójwymiarowy obraz obiektu na ekranie fluorescencyjnym.

Mikroskopia skaningowa umożliwia uzyskanie trójwymiarowego obrazu wirionów (wcześniej preparat jest spryskiwany metalami), rozróżnienie szczegółów struktury ich powierzchni, ale nie ujawnia ich struktury wewnętrznej. Rozdzielczość mikroskopu skaningowego to 7-20 nm.

- Mikroskopia świetlna

W mikroskopie świetlnym można zobaczyć duże wirusy, których wymiary mieszczą się w rozdzielczości mikroskopu - co najmniej 0,2 mikrona. Jak również wtrącenia wewnątrzkomórkowe w tkankach dotkniętych wirusem.

Duże wirusy, takie jak pokswirusy i wtrącenia są wykrywane przy użyciu specjalnych metod barwienia, w kontraście fazowym, w ciemnym polu widzenia; stosuje się również mikroskopię fluorescencyjną.

Duże wirusy są wykrywane przez barwienie według Morozova (srebrzenie). Aby zidentyfikować wtrącenia wewnątrzkomórkowe, z zaatakowanych tkanek, preparatów wymazowych lub odcisków przygotowuje się skrawki histologiczne. Zazwyczaj preparaty barwi się według Romanowskiego-Giemsy, czasem innymi metodami. Największe znaczenie praktyczne ma wykrycie inkluzji Babes-Negri w komórkach nerwowych mózgu w przypadku wścieklizny. Aby to zrobić, preparaty są barwione według Manna.

Mikroskopia luminescencyjna. Preparaty przygotowane z materiałów zawierających duże wirusy, wtrącenia wewnątrzkomórkowe, nagromadzenie antygenów wirusowych barwi się roztworami barwników fluorochromowych. Klastry genomowych wirusów RNA zabarwionych na pomarańczowo akrydyną i ich wtrącenia są widoczne pod mikroskopem fluorescencyjnym UV jako świecące czerwone granulki na tle bladozielonej cytoplazmy komórkowej; Wirusy genomowe DNA wydzielają szmaragdowozieloną poświatę.

Metoda immunofluorescencyjna oparty na połączeniu wirusów, inkluzji wewnątrzkomórkowych, nagromadzenia antygenów wirusowych ze specyficznymi przeciwciałami przeciwwirusowymi znakowanymi barwnikami fluorochromowymi. Powstałe kompleksy dają luminescencję pod mikroskopem fluorescencyjnym.

46. ​​​​Kultury komórkowe i ich rodzaje. System, w którym komórki, tkanki lub narządy usunięte z organizmu zachowują żywotność przez co najmniej 24 godziny. Ocaleni: w których komórki zachowują swoją wrodzoną aktywność życiową bez reprodukcji. Rosnące: zachowują swoją wrodzoną aktywność życiową i są zdolne do proliferacji. Ze względu na rosnący wzrost dzielą się na 3 grupy: zawieszenie; osocze (hodowle utrwalonych fragmentów tkanki); pojedyncza warstwa. Jednowarstwowe są podzielone na 4 grupy: pierwotne trypsynizowane; subkultury; półprzeszczepialne i wymienne. Zawieszenie: rosną w postaci zawiesin, komórki namnażają się na specjalnej pożywce plus ciągłe mieszanie za pomocą wałków. Komórki rozrastają się na całej powierzchni materaca. Duża liczba komórek na szczepionki. Osocze: kawałki tkanki utrwalone plazmą, to jest kultura tkankowa. Uzyskuje się go przez zamocowanie kawałka tkanki na szkle szalki wirusologicznej, następnie dodanie pożywki i hodowlę; w tym przypadku wzrost komórek jest rejestrowany na obwodzie kawałka tkanki. Służy do pozyskiwania kawałków materiału. Pojedyncza warstwa: aby wskazać wirusa. Z tkanek lub narządów uzyskanych przez traktowanie trypsyną. Subkultury uzyskuje się z pierwotnych przez przeszczep. Dalsze częściowe przesadzanie przez przeszczep wielokoronowy. Mają diploidalny zestaw chromosomów. Wytrzymuje diploid w zależności od wieku lub tkanki, z której uzyskano hodowlę komórkową. Jeśli zarodek - do 80 dni. Dorosły - nie więcej niż 25 przeszczepów. Stary ma nie więcej niż 5. Przeszczepione to komórki zmutowane i rakowe. Trwają nieskończoną liczbę razy. To są transformowane komórki - guz nowotworowy. Hela jest najbardziej znaną ciągłą hodowlą komórek od 1956 roku. Ta kultura znajduje się we wszystkich laboratoriach świata. Jest przystosowany do wielu patogenów. Ci, którzy są poddani perfuzji, mają wiele zalet: nie umierają; wyższa stopa wzrostu; wszystkie są genetycznie takie same. W laborptoriach są utrzymywane przez przenoszenie z jednego naczynia do drugiego.

59. doskonalenie zawodowe. Jest to metoda wskazania wirusa w hodowli komórkowej. CPD odnosi się do wszelkich zmian w komórkach w hodowli komórkowej pod wpływem namnażającego się w nich wirusa. Używam małego powiększenia patrząc na górną warstwę materaca. Zakażone komórki porównuje się z niezakażonymi komórkami. Różnice mogą obejmować całą monowarstwę lub tylko obszary. Oceniane w crist lub punktach. Jeśli więc cała monomylowa CPD uległa zmianie, ocenia się ją na 4 krzyżówki; jeśli ¾ - o 3 kr; ½ za 2 kr; ¼ - za 1 krzyż. Formy CPD zależą od biologicznych właściwości wirusa, typu komórki, dawki infekcji, warunków hodowli itp. Niektóre wirusy wykazują CPD po 2-3 dniach, inne po 1-2. 3 formy cpd: podział- zniszczenie komórek na oddzielne fragmenty, które są oddzielone od szkła i przechodzą do płynu hodowlanego. zaokrąglanie- komórki tracą zdolność przyczepiania się do szkła, przybierają kulisty kształt, oddzielają się i swobodnie pływają tam, gdzie umierają. Formacja Symplast- rozpuszczanie błon komórkowych, w wyniku którego cytoplazma sąsiednich komórek łączy się, tworząc jedną całość, w której znajdują się jądra komórkowe. Takie formacje nazywane są symplastami - gigantycznymi komórkami wielojądrowymi. Konieczne jest wykonanie co najmniej 3 ślepych pasaży w celu oceny obecności wirusa w badanym materiale. Hemadsoption - połączenie czerwonych krwinek z powierzchnią komórek zakażonych wirusem.

51. Obliczanie miana wirusa według Reeda i Mencha. Miareczkowanie wirusa ze statystycznie ocenianym efektem z obliczeniem miana metodą Reed i Mench. W tej metodzie miareczkowania można zastosować dowolny model biologiczny, ale ten model musi być wrażliwy na miareczkowanie wirusa (hodowle komórkowe; zarodki; zwierzęta laboratoryjne). Ze względu na efekt infekcyjny zakażonych modeli biologicznych podzielono je na następujące kryteria: zgodnie z rozpoznaniem klinicznym; zgodnie ze zmianami patomorfologicznymi; po śmierci modelki; nagromadzenie hemaglutyniny. Wyniki pracy zależą od dawki wirusa. Ustalono, że dawka wirusa wywołująca 50% efektu zakaźnego jest najmniej podatna na wahania i jest najbardziej określona ze wszystkich możliwych dawek. Miano jest wyrażone jako skuteczna dawka 50%. Jest to ED 50. W zależności od zastosowanego modelu biologicznego i uzyskanego efektu dawkę 50% można wyrazić w następujących jednostkach: LD 50 - ID 50 ELD 50 EID 50 CPD 50 jest 50% dawką cytopatogenną określoną na hodowlach komórkowych metodą cpd. Jeśli w zainfekowanych systemach nie zaobserwujemy 50 procent działania tych ID 50, to wyliczamy miano według trzciny i mencha: lg LD 50 = lg EVA - (% lat EVA - 50%) / (% lat EVA - % lat ACI) WSZYSTKO TO JEST POMNOŻONE PRZEZ krotność lg

36. Zasady i godziny pracy w laboratorium wirusologicznym. Wszyscy studenci są poinstruowani i przeszkoleni w zakresie bezpiecznych metod tr. Zabrania się wstępu na teren produkcji osób nieuprawnionych, a także bez szlafroka i obuwia zmiennego. Zabrania się wychodzenia z laboratorium w szlafroku i czapce. Palenie, jedzenie w laboratorium i przechowywanie żywności. Cały materiał wchodzący do laboratorium powinien być traktowany jako zainfekowany. Pod koniec pracy Miejsce pracy uporządkować i ostrożnie detsenfitsirovat. Etykietowanie naczyń zawierających materiał zakaźny. Ręce w rękawiczkach myje się w słoiku z 5% roztworem chloramidu, następnie rękawice zdejmuje się i dezynfekuje po raz trzeci, dezynfekuje i myje. Ra Praca wirusologa laboratorium opiera się na trzech głównych zasadach: zapobiegać infekcji pracowników lub osób pracujących z materiałami zawierającymi wirusy. Aby zapobiec zanieczyszczeniu materiału (narzędzia, naczynia są sterylne) czyszczenie pomieszczeń roztworem dezynfekującym + lampy UV. Zapobiegaj usuwaniu wirusa poza laboratorium (powietrzem, naczyniami, materiałem stałym i płynnym). Pipety, szklanki należy wrzucić do sterylizatora. Probówki z wirusami, chusteczki - w autoklawie. Nie otwieraj wirówki, dopóki się nie zatrzyma. Usunąć powietrze ze strzykawki tylko wacikiem z 75% alkoholem. Zabrania się wietrzenia pomieszczenia systemem wentylacji z filtrem.

37. Środki ostrożności dotyczące materiałów zawierających wirusy. Unikaj rozprzestrzeniania się wirusów w środowisku zewnętrznym. Zapobiegać skażeniu (zanieczyszczeniu) materiału zawierającego wirusy obcą mikroflorą. Zapewnij bezpieczeństwo osobiste. Aby spełnić te wymagania, konieczne są następujące zasady pracy: być uważnym, zebranym i dokładnym; być tylko w szlafroku i przebierać się w szafie; pracować tylko z zapinanymi mankietami w czapce i masce z gazy; ściśle przestrzegać czystości i porządku w laboratorium; na pulpicie nie powinno być żadnych obcych przedmiotów; palenie i jedzenie jest zabronione. Używaj sterylnych narzędzi i przyborów. Pracuj z naczyniami w pobliżu płomienia palnika. Nie wkładaj palców do ust. Zużyte urządzenia w sterylizatorze. Zużyte pipety zebrać do naczynia z roztworem dezynfekującym. Zbieraj odpady stałe lub płynne (wapa) do specjalnych pojemników w celu późniejszej dezynfekcji. Nie wylewaj odpadów do zlewów lub toalet.

33. Mechanizm przeciwwirusowego działania interferonu. Interferon nie ma bezpośredniego wpływu na wirusa. Wpływa tylko na komórkę, aktywując syntezę niektórych enzymów komórkowych. W szczególności enzym kinaza białkowa i 2,5 oligosyntetaza. Informacja o syntezie tych enzymów znajduje się również w pewnych częściach genów komórki i jest również w stanie represyjnym. Pod wpływem powietrza dochodzi do derepresji genów odpowiedzialnych za syntezę kinazy białkowej i syntetazy 2,5 lub goA. A ich synteza gwałtownie wzrasta. 1) w powietrzu kinazy białkowej czynnik inicjujący ulega fosforyzacji, co zapewnia wiązanie z rybosomem wirusowego informacyjnego RNA. Tak więc wirusowy informacyjny RNA nie może wiązać się z aparatem rybosomalnym komórki, tj. z początkiem translacji. I w końcu synteza wirusowych białek i enzymów staje się niemożliwa. 2) pod wpływem interferonu następuje aktywacja syntezy syntetazy 2,5-oligoA, która katalizuje syntezę kwasu 2,5-oligoadenylowego w komórce. Kwas ten przełącza działanie nukleaz komórkowych na niszczenie wirusowego informacyjnego RNA. Tak więc pod wpływem interferonu następuje: blokowanie translacji wirusowego informacyjnego RNA; zniszczenie wirusowego informacyjnego RNA. Hamujący wpływ interferonu na reprodukcję komórek: interferon w stężeniu od 0 do 1000 jednostek na ml hamuje namnażanie się wielu różnych komórek w dowolnej tkance. Interferon reguluje wzrost wielu typów komórek, w tym pierwotnych kultur komórkowych, komórek nowotworowych. Podstawą jest zahamowanie syntezy niektórych białek komórkowych i synteza nowych białek przez interferon. Inter zwiększa zabójczą aktywność limfocytów T. W dużych dawkach hamowane jest tworzenie przeciwciał. Przeciwnie, małe dawki stymulują tworzenie przeciwciał. Krailing - przetworzone klatki małe dawki forma interf bardziej intr niż surowa. Zbyt duże dawki - proces odwrotny.

35. Rodzaje interakcji wirusa z komórką. Produktywny i nieudany. Produktywny dzieli się na lityczne i utajone. Produktywny: jest to rodzaj wzajemności, w której w komórce tworzy się nowa generacja wirionu. Jeśli komórka szybko umiera po obrazach nowego wirionu pok, jest to produktywny szlak lityczny interakcji wirusa z komórkami. jeśli komórka, w której wielkość wirusa przez długi czas zachowuje swoją żywotność (poprzez pączkowanie), to jest to produkt utajonego typu interakcji. Nieudany: jest to rodzaj wzajemności, w której reprodukcja wirionów zatrzymuje się na dowolnym etapie, vir inf nie rozwija się. W wyniku interakcji wirusa z komórką w komórce mogą wystąpić następujące zmiany: zwyrodnienie komórek- komórki najpierw przekształcają się w nieregularny kształt, potem okrągły, w cytoplazmie pojawia się ziarnistość, następnie fragmentacja jądra, a następnie śmierć komórki. Takie zmiany nazywamy doskonaleniem zawodowym. W krzyżykach: 4 krzyżyki - 100% cpd. Formacja Symplast- komórki wielojądrowe. Formowanie ciał inkluzyjnych- mb wewnątrzjądrowe i osocze, zawierające RNA lub DNA. Transformacja komórek wirusy onkogenne (retrowirusy RNA). Rozmnażaniu w komórce wirusów onkogennych nie towarzyszy CPD. Komórka stale wytwarza wirusa. Synteza interferonu.

4. Odporność wirusów na czynniki fizyczne i chemiczne. Odporność wirusów zwierzęcych jest stosunkowo dobrze zbadana pod wpływem czynników zewnętrznych: tempa, promieniowania, ultrafiolu, ultradźwięków, pH, formaliny, fenolu itp. W celu ochrony przed tymi skutkami wiriony mają otoczkę białkową. Odmienna budowa i skład chemiczny otoczek białkowych decyduje o nierównej odporności wirusów. W zależności od tych cech ten sam czynnik może całkowicie zniszczyć niektóre wiriony, a inne nie. Na przykład rozpuszczalniki organiczne: te wiriony w skorupkach, w których nie ma lipidów, są odporne na te substancje, a te zawierające lipidy są szybko niszczone. Inaktywacja wirusów oznacza całkowitą lub częściową utratę ich aktywności biologicznej, która następuje w wyniku działania czynników fizykochemicznych. Wraz ze zmianą wirusowych jąder kwasów i białek następuje całkowita inaktywacja, tj. utrata wszystkich biologicznych właściwości wirusa - traci tylko właściwości zakaźne i zachowuje immunogenność. Charakter i stopień działania czynników o charakterze chemiczno-fizycznym na wirusa zależy od charakteru czynnika inaktywującego, od dawki, przez długi czas, od rodzaju wirusa. Kiedy wirus jest inaktywowany, może nastąpić albo rozszczepienie białek otoczki, a następnie jego rozpad na oddzielne jednostki, albo zagęszczenie białek przy zachowaniu ogólnej struktury otoczki. Rozszczepienie obserwuje się pod działaniem kwaśnego i zasadowego środowiska z długotrwałym i słabym ogrzewaniem.Koagulacja i zagęszczanie następuje, gdy są one wystawione na działanie formaldehydu, wysokiej temperatury lub fenolu. Zależy od koncentracji i czasu trwania. Tak więc w niektórych przypadkach koagulacji białek obolu towarzyszy niszczenie jąder kwasów, a wirus cierpi na nieodwracalną utratę zakaźności. W innych przypadkach zdolność wirusa do reprodukcji jest zachowana. Konserwowane gliceryną.

60. PCR. Zasada metody: identyfikuje się konkretny gen dla danego wirusa - odcinek cząsteczki DNA, który niesie informacje do syntezy jednego białka. Gen ten jest następnie identyfikowany w badanym materiale metodą PCR. Ta reakcja pozwala na utworzenie dodatkowych kopii genu - amplifikację odcinka DNA w probówce. W zależności od celu badania możliwe jest zidentyfikowanie gatunku lub rodzaju mo. Istota PCR: cząsteczka DNA jest podgrzewana do 90-94 stopni. Co prowadzi do zniszczenia wiązań wodorowych między zasadami azotowymi podwójnej helisy, a następnie schłodzenia do 52 g w obecności enzymu polimerazy DNA. Późniejszy wzrost tempa prowadzi do syntezy nowej cząsteczki DNA – komplementarnej matrycy. Ta procedura jest powtarzana wiele razy, w wyniku czego fragmenty się powiększają. Wskazanie przeprowadza się za pomocą elektroforezy lub znakowanej sondy DNA. Główne składniki: polimeraza DNA termostabilna; oligonukleotyd 20 nukleotydów; trifosforany; wzmacniacz, szalki i odczynniki do elektroforezy w żelu agarozowym. Inscenizacja: uzyskanie próbki DNA. W tym celu badany materiał zawiesza się w buforze lub wodzie destylowanej. Dodano OH sodu i trzymano przez 7 minut. Mieszanina jest neutralizowana. Lizat odwirowuje się przez 10 minut w celu wytrącenia dużych cząstek.Nadsącz jest używany do rozpoczęcia reakcji PCR. PCR - amplifikacja danego fragmentu genu DNA. Następnie stopił się we wzmacniaczu przez 3 godziny. Wskazanie amplifikacji – próbka jest poddawana elektroforezie w żelu agarozowym w celu oddzielenia DNA. Po 30 minutach agaroza jest polimeryzowana w agarozie iw agarozie tworzą się dołki. weź 10 µl mieszanki i wymieszaj z 5 µl barwnika. Mieszaninę dodaje się do studzienek i prowadzi się elektroforezę przez 40 minut. Płytkę wyjmuje się i barwi przez 10 minut w roztworze bromku. Agarozę następnie umieszcza się na transiluminatorze i fotografuje się uzyskane wzory prążków. Prążki ujawnione przez promieniowanie ultrafioletowe to fragmenty DNA.

49. Metoda infekcji kultur komórkowych. Wskazanie wirusów w hodowlach komórkowych. Infekcja: w tym celu wybiera się probówki z ciągłą monowarstwą komórek. Pożywkę wzrostową odsącza się, komórki przemywa się kilka razy roztworem Hanka. Do każdej probówki dodaje się 0,2-0,1 ml materiału wirusa i rozprowadza równomiernie na całej warstwie komórek przez wstrząsanie. W tej formie probówki pozostawia się na 1 do 2 godzin w temperaturze 22 lub 37 stopni w celu adsorpcji wirusa na powierzchni komórki. Następnie materiał wirusa usuwa się z probówek i pożywkę podporową wlewa się do probówki 1-2 ml. pojedynczą warstwę komórek po wyizolowaniu wirusa przemywa się 2 razy roztworem Hanka, a następnie wlewa do pożywki podtrzymującej. Wskazanie: zgodnie z CPD; RGAd; przez tworzenie tablic; inkluzje wewnątrzkomórkowe; RAFA; mikroskopia elektronowa

54. RTGA. RGA. RTG: istota- gdy wirus zostanie zmieszany ze specjalną surowicą, wirus traci swoje właściwości hemaglutynujące. Cele– identyfikacja izolowanego viru; wykrywanie przeciwciał w surowicy testowej i ich miana. składniki- w przypadku serowariantu bezpośredniego: materiał zawierający wirus, surowica swoista, 1% zawiesina erytrocytów, roztwór soli fizjologicznej do rozcieńczenia. Dla retrospektywnej - testowa surowica, standardowy antygen w określonej dawce 4 HAU (miano wirusa rozcieńczenia) 4 HAU - 1:32. Schemat– do każdego rozcieńczenia surowicy dodać równą objętość standardowego antygenu (wirusa) w dawce 4 HAE. Kontakt 30 minut w temp. pok. Do każdego dołka z rozcieńczeniami surowicy i stałą dawką wirusa na 4 ha dodać równą objętość zawiesiny erytrocytów. Kontakt 30-60 min w temp. pok. Księgowość reakcje są przeprowadzane w cristae. jeśli plus, to nie ma aglutynacji, jeśli minuty, to hemaglutynacja. Miano przeciwciał w surowicy testowej to maksymalne rozcieńczenie surowicy, które całkowicie opóźnia aglutynację erytrocytów.RGA: istota: w adsorpcji wirusa na powierzchni erytrocytów, co prowadzi do sklejania. Cele: wskazanie; do miareczkowania wirusa w Gaen. Składniki: wirus; 0,5 zawiesiny erytrocytów; roztwór soli do przygotowania. Schemat postu: przygotuj dwukrotne rozcieńczenie wirusa; dla każdego rozprzestrzeniania się wirusa dodać równą objętość 0,5% zawiesiny erytrocytów; kontakt 30-60 minut w temp. pok. Rachunkowość: w crist. 4 cristae - 100% aglutynacja. 3 kryształy - 75%. 1 krzyż - aglutynacja. 1 gaen to maksymalne rozcieńczenie wirusa zdolne do wywołania aglutynacji 50% erytrocytów.

57. ELISA. Esencja: podczas wiązania antygenu + surowica znakowana enzym rozkłada substrat. Powstaje kompleks antygen + koniugat z wytworzeniem barwnego produktu reakcji, który ocenia się pod mikroskopem świetlnym lub wizualnie. Cel: identyfikacja. Składniki: materiał wirusowy, koniugat, substrat. Schemat postoju: kulitru komórek utrwala się schłodzonym acetonem. Wysuszyć i nałożyć na nie koniugat. 1-2 godziny inkubowane w tempie 37 g w wilgotnej komorze. Spłucz roztworem soli, spłucz destylat wodą i osusz. Nanosi się na nią kilka kropli roztworu substratu, inkubuje przez 5-10 minut, a następnie przemywa solą fizjologiczną i spłukuje wodą. Rozliczenie: w przypadku, tj. w obecności antygenu, po zastosowaniu koniugatu powstaje kompleks antygen plus przeciwciało znakowane enzymem. Po nałożeniu podłoża rozkłada się on pod wpływem enzymu tworząc barwny produkt, który jest wyraźnie widoczny w mikroskopie świetlnym.

56. RSK. Konkluzja: w wiązaniu komplementu z kompleksem antygen plus przeciwciało. Brak wolnego komplementu w tym systemie ocenia się na podstawie retencji hemolizyny w systemie wskaźników. Cele: identyfikacja; wykrywanie przeciwciał i ich miana w badanej surowicy krwi. Składniki: 2 systemy - 1) (materiał zawierający wirus; surowica specyficzna;) (surowica testowana; antygen standardowy). 2) układ hemolityczny (wskaźnik) – 2-3% zawiesina erytrocytów owiec jest antygenem; hemolizyna (surowica hemolityczna) jest przeciwciałem. Przeciwciała odpowiadają antygenowi. I komplement tylko za 1 reakcję: jeśli pierwszy, to nastąpi opóźnienie hemolizy, gdy komplement zetknie się z badanym systemem. Jeśli w drugim przypadku erytrocyty zostaną poddane lizie, nastąpi całkowita hemoliza. Schemat wiązania: reakcję najpierw umieszcza się w badanym układzie, następnie do tej samej probówki dodaje się układ wskaźnikowy. Rachunkowość: dodatni RSK - opóźnienie hemolizy. Negatywny - całkowita hemoliza.

7. Białka wirusowe. Składa się z aminokwasów. Skład białka wirusowego zależy od sekwencji aminokwasów, kolejność ta jest zdeterminowana przez informację genetyczną zakodowaną w genomie wirusa. Białka wirusowe dzielą się na strukturalne i niestrukturalne. Białka strukturalne są częścią dojrzałych wirionów. Niestrukturalne b nie są częścią dojrzałych wirionów, ale są obowiązkowe na niektórych etapach reprodukcji. StrukturalnyNie strukturalny

8. Enzymy wirusowe. Mają charakter białkowy. Mogą być połączone bezpośrednio z wirionem, a mb nie są połączone - nie strukturalne. w DNA Dla RNA: Polimiraza DNA zależna od RNA - nie występuje w komórce, jest potrzebna do „-” zawierającej RNA i DNA, zawierającej w rodzinie retrowirusów vir enzym transhibitujący genom wirusa nazywany jest polimirazą DNA zależną od RNA. Enzym ten ma nazwy: odwrotna transkryptaza, odwrotna transkryptaza. Enzymy biorące udział w tworzeniu białek wirusowych: proteazy, kenazy białkowe.

52. RN.Istota: Gdy wirus wchodzi w interakcję z określoną surowicą, wirus traci swoje właściwości zakaźne, tj. zdolność do namnażania się w komórkach. Cele: identyfikacja izolowanego wirusa, wykrywanie przeciwciał w surowicy krwi i miana przeciwciał. Składniki: materiał zawierający wirusy, specyficzna surowica, model biologiczny. Jeśli retrospektywnie: surowica testowa, antygen standardowy, model biologiczny. Ogólny schemat ustawień: antygen i przeciwciało miesza się, kontakt 30-40 minut, maksymalnie 2 godziny w temperaturze 37-38 stopni; mieszanina antygenu i przeciwciała infekuje model biologiczny; obserwacja i rachunkowość. Księgowość: dodatnie pH - żywe, ujemne - martwe.

53. PROW.Istota: antygen i przeciwciało o tej samej nazwie umieszczone w tej samej odległości od siebie w żelu agarowym dyfundują do siebie, tworząc osad w postaci białego pasma w miejscu spotkania. Cele: identyfikacja izolowanego wirusa, wykrywanie przeciwciał w surowicy testowej. Składniki: materiał zawierający wirus, specyficzna surowica, żel agarowy. Dla retrospektywy: testowa surowica krwi, standardowy antygen, żel agarowy. Schemat ustawień: powłoki agarowe przygotowuje się na szkiełku, przygotowuje się dołki, do dołków dodaje się składniki reakcji zgodnie z określonym schematem, szkło z odczynem umieszcza się w termostacie w temperaturze 37-38°C. Odliczanie reakcji po 48 godzinach. Pozytywną reakcją jest powstawanie białego pasma opadów.

55. RGAd, RTGAd. RGAd: Istota: w adsorpcji erytrocytów na powierzchni komórek zakażonych wirusem. Cele: wskazanie wirusa. Składniki: kultura komórkowa zainfekowana materiałem zawierającym wirusa; zawiesina erytrocytów . Schemat ustawień: zakażać wstępnie jednowarstwową hodowlę komórkową materiałem testowym. Kultury są spuszczane do podłoża podtrzymującego. Przemyte roztworem Hanka. Zrób zawiesinę erytrocytów. Kontakt 5-15 minut w temp. pok. Księgowość: przeprowadzone pod mikroskopem świetlnym. Pozytywny - erytrocyty są adsorbowane na komórkach; ujemny - erytrocyty swobodnie unoszą się. Reklama RTGA: istota: w wiązaniu swoistych przeciwciał z powierzchnią komórek zakażonych wirusem, co prowadzi do zahamowania adsorpcji na komórkach erytrocytów. Cele: identyfikacja wyizolowanego wirusa. Składniki: zainfekowana hodowla komórkowa; specyficzna surowica; zawiesina erytrocytów. Schemat ustawień: preinfekować jednowarstwową hodowlę komórkową jednowarstwowym początkowym materiałem zawierającym wirusa. Odcedzić na podłoże podtrzymujące i dodać 0,8 ml specyficznej surowicy. Kontakt 20-30 minut. Dodaj zawiesinę erytrocytów. Kontakt 5 - 15 minut. Księgowość: do kontroli koniecznie umieścić RGA. Rachunek w probówkach doświadczalnych: dodatni - erytrocyty swobodnie pływają, ujemny - erytrocyty również swobodnie pływają. Rozliczanie w probówce kontrolnej przy dodatnim - adsorpcja, ujemnym - swobodnie pływa.

6. Wirusowe kwasy nukleinowe.+ RNA to wirusowe jądra kwasów, które pełnią funkcję i informatyczny RNA. Informacja o białku układu syntetyzującego w RNA+ jest natychmiast przekazywana do genomowego RNA bez transkrypcji. Wirusy zawierające -RNA to wirusy z - jednoniciowym RNA, które nie pełni funkcji informacyjnego RNA, w takich wirusach synteza informacyjnego RNA (transkrypcja) zachodzi na matrycy minus nici genomowego RNA przy użyciu ściśle specyficznego dla wirusa enzymu związane z gnomowym RNA, polimirazą RNA zależną od RNA. Istnieją wirusy zawierające zarówno nici plus jak i minus RNA, w tym adenowirusy, paramyksowirusy. Informacja genomowa w dwuniciowym DNA jest zakodowana na obu niciach Kwasy nukleinowe są reprezentowane przez polinukleotydy składające się z pojedynczych nukleotydów. Ich liczba w kwasach nukleinowych jest różna. Każdy nukleotyd składa się z 3 podjednostek: reszty kwasu fosforowego, węglowodanu i zasady azotowej.

9. Struktura wirusów. Podstawowe formy. Typy symetrii. Struktura: DNA: częściej dwuniciowy, informacja o genach jest zakodowana na obu niciach. Wirusowe DNA może być ułożone liniowo, kołowo. Może być jednoniciowy. Wirusowe RNA: częściej jednoniciowe, rzadziej dwa. Zlokalizowane są liniowo, pierścieniowo, rozczłonkowane. Z reguły składają się z 11-12 fragmentów. Jednoniciowe RNA vir mogą być dwojakiego rodzaju: RNA o dodatniej i ujemnej nici (genom ujemny) Typy symetrii: układ podjednostek białkowych (kaposmerów) określa typ symetrii wirionu - helikalna, sześcienna, kombinowana. Spirala Jest to rodzaj symulacji, w której kapsomery są ułożone spiralnie wokół jądra kwasu. Ten typ Sima mają duże wirusy i niektóre średniej wielkości wirusy. Kształt: pręcikowy, polividny, kulisty, owalny. W przypadku wirusów w kształcie pręcików kapsyd składa się z kapsomerów ułożonych wokół jądra kwasowego w spiralnych zwojach o tej samej średnicy, ściśle przylegających do siebie.W przypadku wirusów kulistych kapsomery są ułożone spiralnie, ale mają różne średnice. Typ sześcienny: ma go większość małych wirusów i znaczna część średnich wirusów. Kształt takich wirusów jest kulisty. Kapsomery kapsydu znajdują się wokół jądra kwasowego, podobnie jak wokół regularnego ciała izometrycznego. otoczka białkowa takich wirusów zbliża się do kształtu ikozydera - regularnej 20-bocznej twarzy. Łączny typ symetrii: składa się ze spirali i sześciennych. Posiadają go wszystkie fagi i niektóre złożone wirusy z rodziny Coxviridae. Posiadają zewnętrzną powłokę w kształcie sześcianu, kapsyd w sposób spiralny. Fagi mają ikosendryczną głowę i proces spiralny.

18. Główne etapy pierwszej fazy reprodukcji wirusa. Jest to faza infekcji komórki, w tej fazie wirion musi skontaktować się z komórką, przeniknąć do komórki i rozebrać się. Pierwszy etap adsorpcji wirionów na powierzchni komórki może przebiegać na dwa sposoby: fizykochemiczny (niespecyficzny); receptor (specyficzny). Szlak fizykochemiczny jest determinowany przez oddziaływanie powierzchniowych sił elektrostatycznych, które powstają między dodatnio naładowanymi grupami białek wirusowych a ujemnie naładowanymi grupami karboksy, siarczanowymi i fosforanowymi ściany komórkowej. Receptor opiera się na specyficznym oddziaływaniu receptora białka wirusa z komplementarnymi receptorami na powierzchni ściany komórkowej. Receptory wirusowe i receptory wrażliwe na ten wirus komórki mają konfigurację komplementarną (jak klucz do zamka). Jeśli komórka nie jest wrażliwa, reabsorpcja nigdy nie nastąpi. druga penetracja - dla różnych wirusów występuje na różne sposoby: za pomocą viropexis; przez stapianie muszli. Viropexis Ten szlak jest podobny do pinocytozy. Najpierw w miejscu adsorpcji na powierzchni komórki wnika ściana komórkowa błony, następnie krawędzie błony łączą się z wnętrzem komórki w wakuoli komórki, znajduje się wirion ze wszystkimi jego otoczkami. sposób połączenie- w tym przypadku akceptujące się części otoczki wirusa i błony komórkowej ulegają stopieniu pod wpływem enzymów specyficznych dla wirusa i w komórce pojawia się tylko wirusowy kwas nukleinowy, podczas gdy szczątki wirusa osadzają się w Błona komórkowa. Trzeci scena- deprotenizacja - uwalnianie z błon - zależy od sposobu, w jaki wirus wnika do komórki. Jeżeli przez stopienie muszli nie wyizoluje się deprotonizacji jako oddzielnego etapu, to następuje ona jednocześnie z penetracją wirusa. W przypadku penetracji przez viropexis, uwalnianie jądra wirusa z błon kwasowych rozpoczyna się po zniszczeniu białek, lipidów, tłuszczów tworzących błony wirusowe. Wszystkie etapy są zależne od temperatury.

20. Transkrypcja. Jest to przepisanie informacji genetycznej z wirusowych kwasów nukleinowych do nowo zsyntetyzowanego wirusowego informacyjnego RNA zgodnie z prawami kodu genetycznego. (wirus musi przedstawić syntetyzowanej komórce białko, zostać przekształcone w RNA). Produkt finalny transkrypcja - wirusowy informacyjny RNA. Transkrypty jednoniciowe + RNA są nieobecne, podczas gdy ich genomowy wirusowy RNA ma informacyjny RNA wirusa. W jednoniciowych RNA genom nie może funkcjonować jako informacyjny RNA, a jego RNA ulega transhibicji przez specyficzny dla wirusa enzym polimyrazę RNA zależną od RNA. ZDJĘCIE!

21. Transmisja. Jest to proces tłumaczenia informacji genetycznej zawartej w wirusowych przekaźnikowych RNA na konkretną sekwencję aminokwasową. Translacja następuje, gdy cztery zasady są połączone w wirusowym informacyjnym RNA z kodem składającym się z 20 aminokwasów. Produktem końcowym translacji są białka wirusowe. Synteza białek - na rybosomach komórki. Składa się z 3 faz: rozpoczęcie tłumaczenia i rozpoczęcie tłumaczenia; kontynuacja; zakończenie - koniec emisji. Inicjacja polega na utworzeniu kompleksu składników niezbędnych do rozpoczęcia translacji, tj. kompleks inicjacyjny z jest również oparty na rozpoznaniu rybosomu wirusowego informacyjnego RNA i jego wiązaniu z pewnymi obszarami zwanymi czapeczką. To jest metylowana guanina. Po rozpoznaniu czapeczki rybosom ześlizguje się w dół cząsteczki informacyjnego RNA, aż dotrze do miejsca, w którym rozpoczyna się dekodowanie informacji.

5. Skład chemiczny wirusów. Wirusy składają się z kwasy nukleinowe (DNA, RNA). Kwasy nukleinowe są reprezentowane przez polinukleotydy składające się z pojedynczych neukleotydów. Każdy nukleotyd składa się z 3 podjednostek: reszty kwasu fosforowego, węglowodanu i zasady azotowej. Białka wirusowe : Składa się z aminokwasów. Skład białka wirusowego zależy od sekwencji aminokwasów, kolejność ta jest zdeterminowana przez informację genetyczną zakodowaną w genomie wirusa. Białka wirusowe dzielą się na strukturalne i niestrukturalne. Białka strukturalne są częścią dojrzałych wirionów. Niestrukturalne b nie są częścią dojrzałych wirionów, ale są obowiązkowe na niektórych etapach reprodukcji. Strukturalny białka wirusowe dzielą się w zależności od umiejscowienia w wirionie na grupę śladową: białka kapsydowe - w kapsydzie; superkapsyd b - w superkapsydzie (w większości białka znajdują się również tłuszcze i węglowodany); białka macierzy - białka warstwy błonowej; Wirusowe białka rdzeniowe to enzymy. Nie strukturalny- w zależności od pełnionych funkcji dzielą się na: regulator ekspresji genomu wirusa; inhibitory biosyntezy komórek; induktory niszczenia komórek; prekursory białek strukturalnych vir białek wirusowych; niektóre enzymy wirusowe nie są częścią dojrzałych wirionów. Lipidy: są głównie częścią otoczki superkapsydu wirionu w złożonych wirusach. Wszystkie z nich nie są kodowane przez genom vir i mają pochodzenie komórkowe. Są reprezentowane przez fosfolipidy, glikolipidy. Węglowodany: są częścią superkapsydu obol, nie są kodowane przez genom wirusa i są pochodzenia komórkowego, są reprezentowane przez glikoproteiny i glikolipidy . Enzymy wirusowe: Mają charakter białkowy. Mogą być połączone bezpośrednio z wirionem, a mb nie są połączone - nie strukturalne. W fazie zmiany informacji biorą udział enzymy, wczesne polimerazy i wczesne repliki. Należą do inhibitorów biosyntezy komórkowej. Enzymy przenoszące transhibicję genomu wirusa: w DNA zawierające wirusy - w komórce znajduje się polimeraza RNA zależna od DNA, w niektórych przypadkach jest ona dostępna dla wirusów, w niektórych nie. Może mieć pochodzenie zarówno komórkowe, jak i wirusowe. W przypadku wirusów zawierających DNA reprodukcja w jądrze ma pochodzenie komórkowe. W cytoplazmie - pochodzenie wirusowe - specyficzne dla wirusa.

Dla RNA: Polimiraza DNA zależna od RNA - nie występuje w komórce, jest potrzebna do „-” zawierającej RNA i DNA, zawierającej w rodzinie retrowirusów vir enzym transhibitujący genom wirusa nazywany jest polimirazą DNA zależną od RNA. Enzym ten ma nazwy: odwrotna transkryptaza, odwrotna transkryptaza. Enzymy biorące udział w tworzeniu białek wirusowych: proteazy, kenazy białkowe.

13. Bakteriofagi. Wirus bakterii. Znane są bakteriofagi DNA i RNA. Większość DNA fagowego jest dwuniciowa. Fagi RNA są jednoniciowe. Kwas nukleinowy faga jest otoczony wielościennym kapsydem (głową), do którego w wielu fagach jest przyłączony wyrostek (ogon). Średnica głowic wynosi około 60-95 nm, a długość procesów to 250 nm przy grubości 10-25 nm. Dodatek służy jako struktura mocująca do bakterii. Interakcja komórek b i drobnoustrojów jest złożonym procesem biologicznym, którego wynik zależy od właściwości fagów i objawia się lizą komórek bakteryjnych. do diagnostyki stosuje się bakteriofagi (wąglik); do leczenia infekcji bakteryjnych; do zapobiegania inf (salmonellozie). ZDJĘCIE!

22. Replikacja wirusowego DNA.

23. Replikacja wirusowego RNA. Jednoniciowy RNA z genomem ujemnym:

25. Montaż wirionów i ich uwolnienie z komórki.

: wybuch petema, pęknięcie, zniszczenie komórki, w której powstały dojrzałe wiriony (wirusy o prostym ułożeniu), komórka umiera. Skomplikowane wychodzą przez pączkowanie, tj. przechodzą przez ścianę komórkową, pączkują. W takim przypadku komórka umiera nie od razu, ale po wyczerpaniu jej rezerw.

19. Druga faza reprodukcji.Etap zaćmienia: etap zmiany informacji. Na tym etapie funkcja genomu komórkowego jest tłumiona, ponieważ uwalnianie bloków kwasu nukleinowego i enzymów wirusowych blokuje aparat genetyczny komórki i systemy syntezy komórki. Prowadzi to do tego, że komórka zatrzymuje reprodukcję własnych składników komórkowych i zostaje przeorganizowana, aby odtworzyć składniki vyrus. W grę wchodzą wczesne repliki i wczesne polimyrazy. Transkrypcja: Jest to przepisanie informacji genetycznej z wirusowych kwasów nukleinowych do nowo zsyntetyzowanego wirusowego informacyjnego RNA zgodnie z prawami kodu genetycznego. (wirus musi przedstawić syntetyzowanej komórce białko, zostać przekształcone w RNA). Produktem końcowym transkrypcji jest wirusowy informacyjny RNA. Transkrypty jednoniciowe + RNA są nieobecne, podczas gdy ich genomowy wirusowy RNA ma informacyjny RNA wirusa. W jednoniciowych RNA genom nie może funkcjonować jako informacyjny RNA, a jego RNA ulega transhibicji przez specyficzny dla wirusa enzym polimyrazę RNA zależną od RNA. ZDJĘCIE!Audycja: Jest to proces tłumaczenia informacji genetycznej zawartej w wirusowych przekaźnikowych RNA na konkretną sekwencję aminokwasową. Translacja następuje, gdy cztery zasady są połączone w wirusowym informacyjnym RNA z kodem składającym się z 20 aminokwasów. Produktem końcowym translacji są białka wirusowe. Synteza białek - na rybosomach komórki. Składa się z 3 faz: rozpoczęcie tłumaczenia i rozpoczęcie tłumaczenia; kontynuacja; zakończenie - koniec emisji. Inicjacja polega na utworzeniu kompleksu składników niezbędnych do rozpoczęcia translacji, tj. kompleks inicjacyjny z jest również oparty na rozpoznaniu rybosomu wirusowego informacyjnego RNA i jego wiązaniu z pewnymi obszarami zwanymi czapeczką. To jest metylowana guanina. Po rozpoznaniu czapeczki rybosom ześlizguje się w dół cząsteczki informacyjnego RNA, aż dotrze do miejsca, w którym rozpoczyna się dekodowanie informacji. Replikacja wirusowego DNA: Replikacja dwóch helikalnych DNA: dwuniciowa cząsteczka DNA jest najpierw rozdzielana na 2 oddzielne nici za pomocą komórkowych enzymów nukleazy, a następnie na jednej z nici wirusowego DNA, z którego wirusowy informacyjny DNA jest tworzony jako matryca. Dzieje się to za pomocą specyficznej dla wirusa lub komórkowej polimerazy RNA zależnej od DNA enzymu. Następnie wirusowe infor RNA przemieszcza się do rybosomu komórki, gdzie zachodzi translacja z wytworzeniem wirusowych białek i enzymów, w tym enzymu polimerazy DNA. Za pomocą polimerazy DNA z nukleotydów komórki powstaje druga komplementarna nić DNA. W ten sposób syntetyzowane są nowe cząsteczki dwuniciowego DNA. Replikacja jednoniciowego DNA: Pojedyncze nici DNA mają dodatnią polaryzację. Z pomocą enzymu specyficznego dla wirusa, polimerazy DNA zależnej od DNA, na wirusowej matrycy jednoniciowego DNA tworzy się komplementarna nić ujemna DNA. Syntetyzowana jest struktura podwójnej helisy, zwana formą replikacyjną. Nici dodatnie jednoniciowego DNA są następnie tworzone na matrycy nici ujemnych postaci replikacyjnej przez wypieranie nici dodatnich DNA z postaci replikacyjnej. Replikacja wirusowych RNA: Jednoniciowe RNA z ujemnym genomem: natychmiast po wniknięciu do komórki zachodzi transkrypcja z utworzeniem wirusowego inf RNA plus. Bierze w tym udział specyficzny dla wirusa enzym polimeraza RNA zależna od RNA. Następnie RNA vir inf ulega translacji z wytworzeniem białek i enzymu polimerazy RNA. Następnie, za pomocą polimerazy RNA, na matrycy plus nici informacyjnego RNA powstają potomne jednoniciowe ujemne nici RNA. Jednoniciowy RNA z dodatnim genomem: po wejściu do komórki plus RNA natychmiast wiąże się z rybosomami, gdzie ulega translacji, tworząc białka i enzym, w tym enzym replikazę RNA. Następnie pod wpływem replikazy RNA powstaje forma replikacyjna. Na matrycy minus RNA formy replikacyjnej, obraz plus nici RNA poprzez przemieszczenie ich z formy replikacyjnej. Replikacja dwuniciowego wirusowego RNA: synteza informacyjnego wirusowego RNA zachodzi na dwuniciowej matrycy RNA przy użyciu enzymu polimerazy RNA zależnej od RNA. Transkrypcja na matrycy nici RNA, każdy fragment jest transkrybowany oddzielnie. Następnie ulegają translacji z utworzeniem białek i enzymu polimerazy RNA, za pomocą tego enzymu na niciach dodatnich informacyjnego RNA tworzą komplementarne nici mins RNA, czyli dwuniciowe RNA. Montaż wirionów i ich uwolnienie z komórki: 2 strategie montażu, dojrzewania i wyjścia z zainfekowanej komórki: realizacja montażu i dojrzewania wewnątrz komórek; połączenie ostatniego etapu montażu wirionu z wyjściem z zakażonej komórki.

Składanie odbywa się poprzez prostą agregację, tj. asocjacja białka vir z kwasem nukleinowym zachodzi pod wpływem czynników fizykochemicznych, czyli przeprowadza się samoorganizację. Opiera się na unifikacji i swoistym rozpoznawaniu kwasów niebiałkowych i białkowo-nukleinowych. Powstaje nukleokapsyd. W przypadku po prostu uporządkowanych wirusów na tym kończy się proces samodzielnego montażu. W złożonych wirusach proces samowystarczalności przebiegał inaczej. Część białka trafia do tworzenia nukleokapsydu, który powstaje jak w prostych wirusach, a część białek przemieszcza się do błony komórkowej. Utworzony nukleokapsyd następnie przemieszcza się tam. A tworzenie powłoki superkapsydowej następuje, gdy wirion opuszcza komórkę, tj. nukleokapsyd jest pokryty od góry białkami, które przeniosły się do błony komórkowej, a podczas opuszczania tej zewnętrznej powłoki osadzają się tłuszcze i węglowodany z komórki . Są dwa sposoby na wydostanie się: wybuch petema, pęknięcie, zniszczenie komórki, w której powstały dojrzałe wiriony (wirusy o prostym ułożeniu), komórka umiera. Skomplikowane wychodzą przez pączkowanie, tj. przechodzą przez ścianę komórkową, pączkują. W takim przypadku komórka umiera nie od razu, ale po wyczerpaniu jej rezerw.

62-63. Ospa owiec i kóz(rodzaj Caprippoxvirus). Zakaźna ektyma owiec i kóz(rodzaj Parapoxvirus) Rodzina: poxviridae. zawierające DNA. Cechy reprodukcji: genom wirusa jest bardzo duży, nawet w zakażonych komórkach replikacja jest zakończona po 6 godzinach. Penetracja następuje przez połączenie błon wirusowych i komórkowych. Po penetracji dwuniciowy DNA jest cięty i replikacja rozpoczyna się natychmiast na obu niciach DNA. Ponadto synteza składników wirusowych zachodzi w cytoplazmie komórek. Montaż wirionu w cytoplazmie. Wyjdź przez pączkowanie.

2. Rola wirusów w patologii zakaźnej zwierząt. Obecnie duże znaczenie w patologii zakaźnej zwierząt, ludzi i roślin mają choroby wirusowe. Ich rola wzrasta wraz z redukcją i eliminacją chorób bakteryjnych, grzybiczych i pierwotniakowych. Choroby wirusowe stanowią około 80 procent w medycynie i 50 procent w weterynarii. Wiadomo, że wirusy wywołują ponad 500 chorób. Pochodzenie wirusowe zostało ustalone w takich szczególnie niebezpiecznych chorobach, jak pryszczyca, księgosusz, pomór świń itp. Wirusologię można podzielić na ogólną i szczegółową. Ogólne badania natury i pochodzenia wirusów, ich klasyfikacji, struktury i skład chemiczny, genetyka i selekcja, metody diagnozy i profilaktyki, podstawy odporności przeciwwirusowej. Private vir bada nazwę i systematyczną pozycję określonych patogenów, strukturę, wielkość i odporność wirionu, terapię, metody diagnostyczne i profilaktykę.

1. Historia rozwoju. Pierwszy okres rozpoczyna się od czasów starożytnych do 1892 roku. W tym okresie wirusologia jako niezależna nauka nie istniała. Badanie chorób o nieznanej etiologii zostało przeprowadzone przez bakteriologów. Drugi okres - kształtowanie się wirusologii jako samodzielnej nauki - obejmuje lata 1892-1950. okres ten rozpoczął się wraz z odkryciem rosyjskiego botanika D.I. Ivanovsky (1898) na filtracie czynnika sprawczego choroby mozaiki tytoniu. Iwanowski, badając etiologię tytoniu, odkrył, że choroba ta jest wywoływana przez specjalny najmniejszy mikroorganizm, który przechodzi przez filtry bakteryjne. Jest niewidoczny pod mikroskopem świetlnym. Nie rośnie na sztucznych podłożach dołowych. Później podobne m.o. wyizolowano z innych roślin, a także zwierząt i ludzi. Zjednoczyli się w niezależną grupę - ultrawirusy. W latach 30. XX wieku zarodki kurze zaczęły być stosowane w praktyce wirusologicznej. W 1956 roku Stanleyowi udało się podzielić wirusa na jego główne składniki - białko i kwas nukleinowy. Pod koniec lat 40. XX wieku powstał elektroniczny mikrofon Rudenberg. A światło stworzył Leeuwenhoek. Radzieccy naukowcy, którzy przyczynili się do wirusologii: Żdanow, Lichaczow, Siurin.

48. Metoda otrzymywania jednowarstwowych pierwotnych trypsynizowanych kultur komórkowych. Do wskazania virs potrzebne są komórki jednowarstwowe. Uzyskuje się go z tkanek lub narządów poprzez traktowanie ich trypsyną. Monowarstwy są podzielone na 4 grupy: pierwotne trypsynizatory; subkultury; diploidalne lub częściowo przeszczepione; splecione. Tkanka jest rozdrabniana i dyspergowana enzymem - trypsyną. Następnie trypsynę usuwa się przez odwirowanie, a do powstałego osadu dodaje się pewną ilość płynnej pożywki. Komórki hoduje się w postaci pojedynczej warstwy - monowarstwy na wewnętrznej powierzchni szkła. Ciągłe zapotrzebowanie na organy od zdrowych zwierząt. ORAZ Użyj embrionów 9-112 dni. Owoskopia. Przetwarzanie powłoki. Nożyczki odcinają muszlę nad granicą mopsa. Zarodek jest sterylnie usuwany. Przemyte roztworem Hanka. Przygotuj torbę mięśniowo-szkieletową. Przemyte roztworem Hanka. Tkanina jest wycinana nożyczkami. Przenieść do kolby trypsynizacyjnej. Kolbę umieszczono na mieszadle magnetycznym na 15 minut. Zawiesinę chłodzi się w naczyniu z lodem. Przefiltrowane do kolby. Zawiesinę komórek odwirowuje się przez 10-15 minut. Usuń trypsynę. Z osadu komórkowego przygotowuje się połączoną masę, wlewa do probówek o pojemności 1 ml i komórki hoduje.

47. Podstawowe roztwory i pożywki.Pochodzenie Rozróżnij naturalne środowiska wykopów i sztuczne środowiska wykopów. Natures - od biologicznie aktywnych: płyn embrionalny, omoczniowy plus dodatek zrównoważonych roztworów soli. Sztuczne - przygotowane z pojedynczych składników. Najczęściej używane są uniwersalne media pitowe i mogą być specjalne. Universal to średnia 199 i średnia igła. Skład mediów artystycznych powinien zawierać aminokwasy, witaminy, enzymy i zbilansowane roztwory soli, czasem wskaźnik (czerwień fenolowa). Istotą wskaźnika jest wykrywanie wirusa poprzez zmianę koloru. Podczas życia komórki pH zmienia się na stronę kwasową. W środowisku kwaśnym kolor wskaźnika zmienia się z purpurowoczerwonego na żółty. Czasami do pożywki dodaje się normalną surowicę krwi i objętość 100 procent objętości pożywki. Serum nazywane jest czynnikiem wzrostu. Jest dodawany w celu namnażania komórek, tylko w pożywce wzrostowej . Przeznaczenie: pożywka dołkowa - jest surowica; wspomagająco – bez serum. Zbilansowane roztwory soli: wszystkie są pochodnymi soli fizjologicznej. Są używane jako podstawa do przygotowania pożywek dołkowych i do wszelkich manipulacji z kulturami komórkowymi (do przemycia czegoś). To rozwiązania Hanka i Earla. Roztwory dyspergujące: do oddzielania komórek od innych i komórek od szkła. Roztwory pepsyny, trypsyny. Ze szkła - rozwiązania wersu. Roztwór Versin wiąże kationy wapnia.

50. Miano wirusa. Miano wirusa to ilość wirusa, tj. dawka na jednostkę objętości materiału zawierającego wirusa. 3 metody miareczkowania: 1 metoda: miareczkowanie wirusa zgodnie z efektem zakaźnym wirusa ze statystycznie ocenianym efektem. Metodą Reed and Mench lub kerberem. Miano wyraża się w dawkach 50%. To jest ED50. W tej metodzie miareczkowania można zastosować dowolny model biologiczny, ale ten model musi być wrażliwy na miareczkowanie wirusa (hodowle komórkowe; zarodki; zwierzęta laboratoryjne). Ze względu na efekt infekcyjny zakażonych modeli biologicznych podzielono je na następujące kryteria: zgodnie z rozpoznaniem klinicznym; zgodnie ze zmianami patomorfologicznymi; po śmierci modelki; nagromadzenie hemaglutyniny. Wyniki pracy zależą od dawki wirusa. Ustalono, że dawka wirusa wywołująca 50% efektu zakaźnego jest najmniej podatna na wahania i jest najbardziej określona ze wszystkich możliwych dawek. Miano jest wyrażone jako skuteczna dawka 50%. Jest to ED 50. W zależności od zastosowanego modelu biologicznego i uzyskanego efektu dawkę 50% można wyrazić w następujących jednostkach: LD 50 - jest to 50 procent śmiertelna dawka otrzymana w laboratorium żywym przez śmiertelne działanie. ID 50 to 50% dawka zakaźna określona dla laboratorium żywego na podstawie objawów klinicznych lub zmian patomorfologicznych. ELD 50- Jest to 50% śmiertelnej dawki embrionalnej ustalonej dla zarodków kurzych na koniec roku. EID 50- jest to 50 procent embrionalnej dawki zakaźnej określonej na zarodkach kurzych przez zmiany patomorfologiczne i akumulację hemaglutyniny. CPD 50 jest 50% dawką cytopatogenną określoną na hodowlach komórkowych metodą cpd. Jeśli w zainfekowanych systemach nie zaobserwujemy 50 procent efektu tych ID 50, to wyliczamy miano według trzciny i mencha: lg LD 50 = lg EVA - (% lat EVA - 50%) / (% lat EVA - % lat ACI) WSZYSTKO TO POMNOŻONE PRZEZ lg wielokrotność hodowli. 2 metoda : na zakaźny efekt wirusa z oceną pojedynczego efektu. Metodą tworzenia płytki nazębnej w hodowli komórkowej - efekt jednorazowy. Jest wyrażany w jednostkach tworzących ospę lub w jednostkach tworzących blaszki PFU. Przygotuj 10-krotne rozcieńczenie wirusa; wybrać czuły model biologiczny; co najmniej 4 zarodki są zakażone w każdym rozcieńczeniu wirusa. Tytuł obliczany jest według wzoru T=a podzielonego przez V*n. a - średnia liczba dziobów lub blaszek. V to objętość zawartości materiału = 0,2. n to stopień rozcieńczenia wirusa. 3 metoda: zgodnie z hemaglutynującym działaniem wirusa w GAEN. Włożyli RGA.

38. Zasady diagnostyki laboratoryjnej zakażeń wirusowych.

Badania laboratoryjne odgrywają ważną rolę w ustaleniu diagnozy chorób zakaźnych, przepisaniu terapii etiotropowej i monitorowaniu skuteczności leczenia. Proces specyficznej diagnostyki laboratoryjnej opiera się na identyfikacji patogenu i reakcji organizmu ludzkiego podczas procesu zakaźnego. Składa się z trzech etapów: zebrania materiału, jego transportu (bodziec nr 39) i badania laboratoryjnego: 1) Metoda wirusologiczna obejmuje dwa główne etapy: izolację wirusów i ich identyfikację. Do izolacji wirusów wykorzystuje się hodowle komórkowe, zarodki kurze, a czasem zwierzęta laboratoryjne. O obecności wirusa w zakażonych hodowlach decyduje rozwój specyficznej degeneracji komórek, tj. działanie cytopatogenne, wykrywanie wtrąceń wewnątrzkomórkowych, a także oparte na wykrywaniu specyficznego antygenu metodą immunofluorescencji, dodatniej hemadsorpcji i hemaglutynacji. Wirusy identyfikuje się metodami immunologicznymi: hamowanie hemaglutynacji, wiązanie dopełniacza, neutralizacja, precypitacja żelowa, immunofluorescencja. 2) reakcje serologiczne; 3) Metoda immunologiczna (testy biologiczne); 4) ELISA i PCR. Po otrzymaniu wyników badania i uwzględnieniu danych epizootologicznych i klinicznych ustala się ostateczną diagnozę.

39. Podejmowanie, przygotowywanie i wysyłanie impasu. Materiał dla wirusologa. Badania.

Zabieranie, transport i badania patowe. materiał podlega przepisom weterynaryjnym. Biorąc pod uwagę tropizm wirusa - preferowaną lokalizację wirusa w tej chorobie i patogenezę. Czas od patowej sytuacji. materiał do końca studiów – 2-4 godz. Jeśli potrzeba więcej czasu, konserwować (metody chemiczne - 50% roztwór glicerolu, fizyczne - zamrażanie), ale nie do świecenia. mikroskopia. Transport w specjalnym pojemniki z towarzyszącymi dokument i kurier. Preparat polega na ekstrakcji wirusa z komórek. płyn materiał - filtracja i wirowanie. Do oczyszczania bakterii - bakteryjnych. filtry i antybiotyki (500-2000 IU na 1 ml), z grzybów - fungicydy (25 IU na 1 ml), trzymaj przez 30-40 minut, uprawiaj rośliny do odżywiania. środowisko (tlenowce - MPA, MPB, NRM, beztlenowce - Kitta-Tarozzi, grzyby - Czapeka, Saburo). Gęsty pat.materiał: 1) weź 1-1,5 g pat.materiału; 2) szlifować nożyczkami; 3) umyć sterylnie. szkło lub piasek w moździerzu; 4) 10% zawiesina z roztworem Hanka; 5) 2 razy zamrozić i rozmrozić; 6) filtracja przez filtr gazowy; 7) wirowanie (3000 obr./min, 15 min); 8) supernatant - materiał zawierający wirusy, sprawdza się pod kątem bakterii (pożywki), dodaje się antybiotyki i fungicydy.

40.Mikroskopowa metoda badań w wirusologii.

1. Mikroskopia świetlna: 1) do wykrywania wirusa ospy (metoda srebrna wg Morozowa); 2) Wykrywanie ciałek inkluzyjnych (jest to nagromadzenie wirionów lub części lub produktów reakcji komórki na wirusa; mogą być wewnątrzjądrowe i cytoplazmatyczne); 3) wykrycie wirusa CPE (zaokrąglenie, fragmentacja, śmierć); 4) wykrywanie symplastów; 5) pracować z C/C; 6) ocena serologa. reakcje (ELISA, RGAd, RTGAd). 2. Mikroskopia luminescencyjna: istota polega na tym, że po napromieniowaniu promieniami UV atomy są wzbudzane, następnie przechodzą w stan początkowy z wyzwoleniem energii w postaci promieniowania świetlnego, jego intensywność szacuje się w krzyżykach (szmaragdowo zielony = ++ ++; zielony = ++ +; zielono-żółty = ++; żółty = +; brak blasku = –). Kompleks - MSZ Istota MSZ - specyficzna. interakcja przeciwciała z surowicą znakowaną fluorochromem (koniugat). 3. Mikroskopia elektronowa: 1) wykrycie dowolnego wirusa; 2) badanie jego wielkości, kształtu, budowy, rodzaju symetrii, reprodukcji; 3) badanie interakcji wirusa z komórką.

Posiadamy własną krajową wyspecjalizowaną kolekcję bakterii i wirusów. Naukowcy od dziesięcioleci skrupulatnie zbierają próbki z całego świata. Po co?

Mijając państwową instytucję „Republikańskie Centrum Naukowo-Praktyczne Epidemiologii i Mikrobiologii” Ministerstwa Zdrowia, znajdujące się przy ulicy Filimonowa w Mińsku, wielu nawet nie podejrzewa, że ​​wesoły niebiesko-niebieski budynek jest w rzeczywistości fortecą prawie nie do zdobycia. To tutaj przechowywana jest narodowa kolekcja wirusów i bakterii, z których wiele może z łatwością zabić człowieka i wywołać epidemię na skalę światową.

Jestem przy wejściu do budynku. Kamery na fasadzie patrzą na mnie wprost. Z rękami w kieszeniach przechadzam się po holu, zastanawiając się, czy okropne eksponaty kolekcji są tak pilnie strzeżone. Oczywiście sabotażu nie zamierzam przeprowadzać, ale to ciekawe.

Aby dostać się na teren Kolekcji, musisz otworzyć drzwi za pomocą elektronicznej karty. I możesz wejść tylko do małego przedsionka. Drzwi ze znakiem alarmowym „Strefa zagrożenia” i gadającą trującą żółtą ikoną zagrożenia biologicznego to kolejny poziom ochrony.

Dalej w szerokim korytarzu znajduje się pokój obserwacyjny. Personel jest tu stale dyżurny. Na monitorze wyświetlane są obrazy z kamer wewnętrznych. Ile? Dziesięć? 20? Po pierwsze, środek ten pozwoli zidentyfikować nieproszonego gościa, jeśli taki pojawi się w ścianach budynku. Chociaż jest to całkowicie wykluczone.

Po drugie, pomoże jak najszybciej zareagować, jeśli pracownik w jednej z sal laboratoryjnych potrzebuje pomocy.

Przez grube dwuwarstwowe szkło zaglądam do sąsiedniego pokoju. Najpotężniejsze mikroskopy z wyświetlaniem obrazów na monitorach komputerowych. Rzędy probówek i kolb, bixy z narzędziami. Drzwi są całkowicie metalowe. Nie łam się, nie łam się. Ale na elektronicznej karcie Larisy Michajłownej bariera odpowiada cichym kliknięciem. Przewodnik wyjaśnia, że ​​jest jedną z nielicznych osób, które mają dostęp do wszystkich pomieszczeń ośrodka. Większość pracowników ma dostęp tylko do ograniczonej ich liczby.

Praca z materiałem zakaźnym – groźnymi wirusami i bakteriami – odbywa się w pomieszczeniach laboratoryjnych tzw. strefy zakaźnej, która jest oddzielona od „strefy czystej” pomieszczeniem kontroli sanitarnej. Przez okno w korytarzu zaglądam do rdzenia ośrodka, gdzie następuje kontakt między asystentem laboratoryjnym a wirusem.

Nie zauważam jednak tak znajomych sylwetek w skafandrach kosmicznych z filmów katastroficznych. Ludzie są ubrani w kombinezony, zwykłe rękawiczki medyczne i lekkie maski oddechowe. Od straszliwej śmierci dzielą ich szklane i metalowe pudła. To właśnie w tych pudełkach, poprzez grube wbudowane rękawiczki i manipulatory, eksperymentują z niebezpiecznymi wirusami.

Jak dotąd nie doszło do żadnych incydentów. Jednak w żadnym wypadku nie można wykluczyć takiej możliwości. Dlatego każdy pracownik przechodzi specjalne szkolenie zgodnie z zasadami pracy z materiałem zakaźnym oraz certyfikacją w celu uzyskania zezwolenia na pracę, które zatwierdza dyrektor ośrodka. Wśród pytań testowych znajduje się również: „Co powinienem zrobić, jeśli fiolka z wirusem pęknie w pokoju?” Jedyną poprawną odpowiedzią jest: „Nie może być”.

Jestem zagubiony. Wychowywany, ogólnie rzecz biorąc, w hollywoodzkich filmach o wszelkiego rodzaju apokalipsach zombie i globalnych epidemiach, wyraźnie wiem, że wszystkie problemy na skalę światową zaczynają się od tego, że niedbały asystent laboratoryjny potyka się i upuszcza delikatne naczynie z zawartością. Koniecznie na metalowej powierzchni lub dokładnie na rogu stołu. Dźwięczny „bing”, lekka chmura mgły, rozpryski cieczy, kamera z bliska pokazuje kratkę wentylacyjną. Syreny, migające światła, wołania o pomoc... Takie rzeczy.

W rzeczywistości w naszym kraju nikt nie pracuje z wirusami z pierwszej i drugiej grupy patogenności (najbardziej agresywnej z czterech istniejących) w taki sposób, że istnieje możliwość złamania lub złamania czegoś.

W jaki sposób pojemnik na wirusy w niewoli jest dostarczany do centrum? Larisa Rustamova demonstruje mały metalowy pojemnik. Otwiera ciasno przylegającą pokrywę. Wewnątrz - pojemniki z czynnikiem chłodniczym, pomiędzy którymi mocowana jest plastikowa obudowa. I tylko w nim jest sztywno zamocowana fiolka. Tak jak w bajce: w zająca - kaczka, w kaczce - jajko, w jajku - igła, a na końcu - śmierć ... Jednak w moim przypadku cała ta „kapusta” zawiera pustą probówkę. Ale „ubrania” ze śmiercionośnym wypełnieniem są „usuwane” tylko w pudełkach, przed systemami ochronnymi, przed którymi ulegają nawet najbardziej okrutne i wszechobecne dolegliwości.

We wszystkich pomieszczeniach za hermetycznymi drzwiami utrzymywany jest specjalny tryb wentylacji, w boksach - podciśnienie. Załóżmy najgorszą opcję: fiolka ze straszną zawartością w linii obronnej zostaje rozbita na strzępy. W takim przypadku powietrze po drodze, zbierając wirusa, zostanie wciągnięte do kanałów wentylacyjnych za pomocą gwizdka. Istnieje również złożony system dokładnych filtrów, które wychwytują cząsteczki wirusa.

Oczywiście wentylacja nie może zawieść?

W przypadku przerwy w dostawie prądu, nawet w skali miasta, dysponujemy autonomicznym generatorem prądu, który łączy się automatycznie.

W naszych czasach ma miejsce globalizacja. Granice między krajami zacierają się, turyści podróżują po całym świecie, przynosząc ze sobą różne choroby. Z tego powodu w komorach zamrażalniczych ośrodka, wraz z wirusami i bakteriami izolowanymi na terenie kraju (grypa, kleszczowe zapalenie mózgu, zapalenie wątroby), przechowywane są szczególnie niebezpieczne patogeny gorączki krwotocznej. Jest Ebola, która powoduje śmierć w 90 procentach przypadków, i nie mniej podstępny wirus Lassa, czynnik wywołujący ciężką gorączkę krwotoczną. W kolekcji znajduje się również wirus Marburg, który po raz pierwszy został wyizolowany w Niemczech i kiedyś pochłonął życie dużej liczby osób. Wszyscy dziś wiedzą o wirusie Zika. Naukowcy z ośrodka zauroczyli go i zaczęli studiować w czasach ZSRR.

Nikt nie może zagwarantować, że w pewnym momencie dżuma, ospa, która kiedyś zabiła miliony ludzi, a teraz zniknęła, nie pojawi się ponownie. Z tego powodu w centrum epidemiologii i mikrobiologii naukowcy przechowują nawet wirusy i bakterie „wycofane” przez samą naturę.

Krótko o aspekcie moralnym. Kilka dni przed moim przyjazdem laboratoria ośrodka właśnie zakończyły badania nad niebezpiecznymi wirusami na zwierzętach laboratoryjnych. Myszy i świnki morskie tradycyjnie stały się obiektami doświadczalnymi.

Jak możesz spokojnie patrzeć w oczy małym zwierzątkom, których lwią część celowo skazujesz na śmierć? - Prowokuję rozmówcę.

Oczywiście szczerze szkoda, że ​​takie eksperymenty trzeba przeprowadzać. Ale przepraszam rozmawiamy o zdrowiu ludzkim, o istnieniu narodu jako całości. Wyobraź sobie, że widzisz przed sobą chore dziecko, któremu nie możesz pomóc tylko dlatego, że kiedyś zadałeś sobie pytanie: „Jak mogę uratować więcej myszy?”. Priorytety muszą być ustawione poprawnie.